產品分類
PRODUCTS CATEGORY
推薦產品
RECOMMENDED PRODUCTS
聯係我們
CONTACT US
電話：13718238054
Q Q： 43834183
郵箱：43834183@qq.com
地址：北京市大興區黃村安順南路
Q Q： 43834183
郵箱：43834183@qq.com
地址：北京市大興區黃村安順南路
無細胞百日咳攻擊菌的製備及液氮保存材料和方法
時間:2019-05-13 10:29來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊:
次
1、 材料 自增壓液氮罐
1.1分裝容器
凍存管：4306592.0ml corning incorporated，cor-ning，NY14831 Made in Mexico。
1.2保護劑及培養基
甘油：分析純。
蛋白腖水、活性炭半綜合培養基和改良包-薑羊血培養基，由長春生物製品研究所培養基室提供。
1.3菌種
百日咳攻擊菌種株18323由中國藥品生物製品檢定所提供。
2、方法
2.1攻擊菌的製備
2.1.1 菌種複蘇及傳代 將菌種在無菌條件下複蘇、溶解、混勻、傳到包$薑羊血培養基中，37℃培養72h，同時作純菌試驗。合格後傳二代經37℃培養48h，用活性炭半綜合培養基傳三代、四代、五代、六代、七代、八代、九代，37℃培養24h。
2.1.2保護劑的製備 將甘油加入蛋白腖水中製成含10%甘油的蛋白腖水，混勻滅菌。
2.1.3 菌懸液的製備 將各代菌液分別刮入裝有ph7.2緩衝生理氯化鈉溶液的大試管中，製成菌懸液並混勻，同時作純菌試驗，測定菌液濃度。
2.2攻擊菌的分裝
將菌懸液用含10%甘油的蛋白腖水稀釋至27億/ml，分裝於滅菌的凍存管中，每管1.5～1.8ml。
2.3攻擊菌保存
為防止細胞急劇冷凍後在細胞內形成冰晶，降低存活率，所以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。然後迅速放入液氮保藏器內的-150℃氣相中，最後浸入到-196℃液氮中。
2.4攻擊菌的檢定
2.4.1攻擊菌複蘇 將凍存管從液氮罐中取出立即放入38～40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。
2.4.2攻擊菌稀釋 打開凍存管，將攻擊菌用生理氯化鈉溶液稀釋成每稀釋度含80000、8000、800、80和8個菌。
2.4.3攻擊途徑及劑量 每稀釋度（0.03ml）腦腔攻擊10隻小鼠，每稀釋度分別攻擊80000個菌、8000個菌、800個菌、80個菌、8個菌。自增壓液氮罐
1.1分裝容器
凍存管：4306592.0ml corning incorporated，cor-ning，NY14831 Made in Mexico。
1.2保護劑及培養基
甘油：分析純。
蛋白腖水、活性炭半綜合培養基和改良包-薑羊血培養基，由長春生物製品研究所培養基室提供。
1.3菌種
百日咳攻擊菌種株18323由中國藥品生物製品檢定所提供。
2、方法
2.1攻擊菌的製備
2.1.1 菌種複蘇及傳代 將菌種在無菌條件下複蘇、溶解、混勻、傳到包$薑羊血培養基中，37℃培養72h，同時作純菌試驗。合格後傳二代經37℃培養48h，用活性炭半綜合培養基傳三代、四代、五代、六代、七代、八代、九代，37℃培養24h。
2.1.2保護劑的製備 將甘油加入蛋白腖水中製成含10%甘油的蛋白腖水，混勻滅菌。
2.1.3 菌懸液的製備 將各代菌液分別刮入裝有ph7.2緩衝生理氯化鈉溶液的大試管中，製成菌懸液並混勻，同時作純菌試驗，測定菌液濃度。
2.2攻擊菌的分裝
將菌懸液用含10%甘油的蛋白腖水稀釋至27億/ml，分裝於滅菌的凍存管中，每管1.5～1.8ml。
2.3攻擊菌保存
為防止細胞急劇冷凍後在細胞內形成冰晶，降低存活率，所以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。然後迅速放入液氮保藏器內的-150℃氣相中，最後浸入到-196℃液氮中。
2.4攻擊菌的檢定
2.4.1攻擊菌複蘇 將凍存管從液氮罐中取出立即放入38～40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。
2.4.2攻擊菌稀釋 打開凍存管，將攻擊菌用生理氯化鈉溶液稀釋成每稀釋度含80000、8000、800、80和8個菌。
2.4.3攻擊途徑及劑量 每稀釋度（0.03ml）腦腔攻擊10隻小鼠，每稀釋度分別攻擊80000個菌、8000個菌、800個菌、80個菌、8個菌。自增壓液氮罐
