細胞的液氮冷凍保存複蘇技術_raybey雷竞技官网杜瓦瓶
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細胞的液氮冷凍保存複蘇技術

時間:2017-08-08 09:10來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊: 次

　　細胞株(係)的使用，為(wei) 醫學研究和測試工作帶來了極大的方便。但細胞的傳(chuan) 代是有限製的，長期連續傳(chuan) 代的細胞，不僅(jin) 消耗大量的人力和物力，而且細胞的生長與(yu) 形態等會(hui) 有一定退變或轉化，因而細胞失去原有的遺傳(chuan) 特性，有時還會(hui) 由於(yu) 細胞汙染而造成傳(chuan) 代中斷，種子丟(diu) 失。因此，在實際工作中常需凍存一定數量的細胞，以備替換使用。細胞冷凍與(yu) 複蘇是細胞培養(yang) 室的常規工作和通用技術。

　　細胞的凍存概述

　　目前，細胞凍存最常用的技術是液氮冷凍保存法，主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍，細胞內(nei) 外的水分會(hui) 很快形成冰晶，從(cong) 而引起一係列不良反應。如細胞脫水使局部電解質濃度增高，pH值改變，部分蛋白質由於(yu) 上述原因而變性，引起細胞內(nei) 部空間結構紊亂(luan) ，溶酶體(ti) 膜由此遭到損傷(shang) 而釋放出溶酶體(ti) 酶，使細胞內(nei) 結構成分造成破壞，線粒體(ti) 腫脹，功能丟(diu) 失，並造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白複合體(ti) 也易破壞引起細胞膜通透性的改變，使細胞內(nei) 容物丟(diu) 失。如果細胞內(nei) 冰晶形成較多，隨冷凍溫度的降低，冰晶體(ti) 積膨脹造成細胞核DNA空間構型發生不可逆的損傷(shang) ，而致細胞死亡。

　　因此，細胞冷凍技術的關(guan) 鍵是盡可能地減少細胞內(nei) 水分，減少細胞內(nei) 冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞(ya) 碸作保護劑，這兩(liang) 種物質分子量小，溶解度大，易穿透細胞，可以使冰點下降，提高細胞膜對水的通透性，且對細胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細胞內(nei) 的水分滲出細胞外，減少胞內(nei) 形成冰結晶的機會(hui) ，從(cong) 而減少冰晶對細胞的損傷(shang) 。