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外周血PBMNC分離及凍存
PBMNC分離效果
按照GMP生產(chan) 規範和臨(lin) 床ACI要求分離外周血PBMNC，冷凍保存前細胞活性為(wei) 99.6%±0.4%（n=5），與(yu) 原始血樣比，PBMNC回收率58.4%±6.52%（n=5）。
細菌和真菌培養(yang) 陰性，實現全程無菌處理。液氮罐
不同冷凍保護液對PBMNC的保護效果不同
PBMNC在－196℃液氮中儲(chu) 存24個(ge) 月後複蘇，鏡下觀察見細胞形態完整，圓形飽滿，PBMNC複蘇效率89.7%±3.82%，凍存液中含80%無血清培養(yang) 基組和含80%自體(ti) 血漿組比較，無統計學差異（P≥0.05）（表1）。
PBMNC凍存後誘導
AIL細胞的體(ti) 外增殖及表型分析在倒置顯微鏡下觀察顯示，外周血單個(ge) 核細胞呈懸浮生長，大小均勻，折光性一致，AIL經4d培養(yang) 後部分細胞明顯增大，可見細胞集落，胞核密度加強，體(ti) 積增大，胞膜光滑，未見突起，新鮮與(yu) 凍存後的單個(ge) 核細胞誘導的AIL在形態和表型上無明顯差別，增殖高峰期均在10－12d。
在培養(yang) 過程中第14天，凍存組AIL細胞所占相對百分率由約2.3%上升約為(wei) 10.4%，細胞數增加約1048倍，對照組AIL所占相對百分率由約2.3%上升為(wei) 約11.3%，細胞數增加約1105倍。兩(liang) 組之間在細胞增長倍數與(yu) AIL所占百分比無顯著差異（P＞0.05）。
（表1）
效應細胞的體(ti) 外細胞毒活性
新鮮的與(yu) 凍存的單個(ge) 核細胞誘導的AIL對NK敏感（K562）或非敏感株細胞（HeLa）及貼壁或懸浮生長的腫瘤細胞均顯示出很強的殺傷(shang) 活性，且該活性隨效靶濃度比的增加而增大，兩(liang) 組間的細胞毒活性無顯著性差異（P＞0.05）（表2）。液氮罐
圖2：比較各種冷凍和對照組之間的增殖和細胞表型。A：所有表型培養(yang) 前。B：所有在冷凍組表型培養(yang) 14 天後。C：所有對照組表型培養(yang) 14 天後，D：所有增殖。E：自體(ti) 免疫淋巴細胞。
（表2）
