外周血單個核細胞分離及冷凍保存_raybey雷竞技官网杜瓦瓶
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外周血單個核細胞分離及冷凍保存

時間:2020-05-20 10:28來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊: 次

細胞分離：

外周血用電動助吸器按照每管不多於(yu) 35ml，平均分至50ml離心管中，931×g，離心8min，吸取上層血漿至50ml離心管中，取1.5ml於(yu) EP管中，標記，－80℃保存。用NA稀釋血細胞，使得血細胞:NA為(wei) 1：1，混勻後均勻緩慢地加至相應的A液上層，形成完整的界麵。596×g，離心20min。可見明顯分層。吸棄第1層上清，小心輕柔地將第2層的白色細胞層分別吸至不同的潔淨50ml離心管中。分別向各管中加NA，稀釋混勻，定容至40ml/管。931×g，離心8min。吸棄上清，加NA重懸細胞。凍存處理前留取細胞懸液計數和活力測定。液氮罐

細胞冷凍保存

純化後細胞重懸於(yu) 含終濃度9.8%的等體(ti) 積DMSO2ml和右旋糖苷的冷凍保存液中，冷凍保護液配置成2組（1組含80%的無血清培養(yang) 液，另1組含80%自體(ti) 血漿）輕輕混勻後置－20℃冰箱冷卻平衡5－15min到4℃以下，同時把凍存管放4℃冰箱平衡15min。分裝入2ml凍存管內(nei) ，每管1ml，管壁做好標識。放在樣本凍存盒，轉移至程序降溫盒儀(yi) 器，最終將細胞保存於(yu) －196℃液氮內(nei) 。液氮罐