園林花卉種子液氮超低溫保存研究

摘要：為(wei) 了探討液氮超低溫保存技術廣泛應用於(yu) 園林花卉種子保存的可能性，對18個(ge) 科47種花卉種子進行了液氮超低溫保存研究。除了兩(liang) 種花卉種子進入液氮後炸裂外，其餘(yu) 45種花卉種子保存後都有一定發芽率，有些花卉種子保存後種子發芽率還高於(yu) 保存前。液氮罐廠家

結果表明：➀液氮超低溫保存技術可以廣泛應用於(yu) 園林花卉的種子保存。➁花卉種子在自然含水量狀態即可存於(yu) 液氮中。➂ 從(cong) 液氮中取出後，采用35～40°C溫水浴化凍有較高的發芽率。➃ 液氮超低溫保存對一些花卉種子萌發表現出促進作用。

關(guan) 鍵詞：液氮超低溫保存，種子，園林花卉，種質保存

我國具有豐(feng) 富的園林花卉種質資源，它們(men) 是我國園林發展的重要物質基礎。但是目前保護力度不夠，大量優(you) 良的種質不斷喪(sang) 失。與(yu) 國外多層次、高安全係數、多種技術並存的種質保存體(ti) 係相比，更是有較大的差距。因此，研究園林花卉種質保存技術研究有重要意義(yi) 。

液氮超低溫保存是一種新的生物技術，應用於(yu) 植物種質資源保存實踐僅(jin) 20多年的曆史。它是采用一定的技術將植物材料安全保存在液氮（－196ºC）中，需要時采用一定方法使之回到常溫並正常生長的一整套生物技術。被認為(wei) 是目前實現生物種質永久保存的唯一途徑而廣泛應用。目前已成功應用於(yu) 植物種子、花粉、器官、組織及懸浮細胞等組織培養(yang) 物的保存。但是目前國內(nei) 外針對園林花卉種子的液氮超低溫保存技術研究不多，主要集中在農(nong) 作物和蔬菜上。液氮罐廠家

為(wei) 了探討該技術在園林花卉種子保存中應用的可能性和廣泛性，本實驗對18個(ge) 科47種花卉種子進行了液氮超低溫保存研究，旨在探討這些花卉種子液氮超低溫保存的技術方法和該技術應用的廣泛程度。

1、材料與(yu) 方法

1.1 材料

供試花卉種子購於(yu) 北京仁生製種公司。目錄如下：

1.2 方法

1.2.1 花卉種子含水量的測定

參照，用烘幹法測定種子含水量。重複兩(liang) 次，差值不超過0.02%。

1.2.2 花卉種子幹燥方法

采用用矽膠幹燥法。將種子放入盛有矽膠的幹燥器中，根據種子含水量及脫水速度，確定放入不同時間以降低其含水量，達到所要求的種子含水量時取出供實驗用。

1.2.3 種子液氮超低溫保存方法

將種子放入Effendorf 試管中，每份30～50粒，蓋緊蓋子，直接投入液氮（－196ºC）中。10min 後將種子從(cong) 液氮中取出解凍。采用快速或慢速兩(liang) 種化凍方法。快速化凍是將種子在40ºC溫水浴中放置6～7min。慢速化凍是將種子置於(yu) 25±2 ºC的室溫中30min 左右。

1.2.4 種子發芽率的測定

中、小粒花卉種子在30ºC溫水中浸種24h，微粒種子在濕濾紙上放置過夜，然後在發芽箱中萌發。為(wei) 方便對比，每個(ge) 萌發芽皿中一半放置對照組種子，另一半放置液氮保存後化凍的種子，每份各30粒。重複兩(liang) 次。

記錄10天內(nei) 種子萌發數，然後計算萌發種子數占種子總數的百分比為(wei) 種子發芽率。發-2-1芽條件：18ºC ，光照強度50umol/ms，相對濕度93%。

2、結果與(yu) 分析

2.1 花卉種子液氮超低溫保存結果

液氮超低溫保存技術實驗研究中，以實驗材料進入液氮後一定時間，取出後材料有一定的生活力來判定保存方法的成功與(yu) 否 。存入液氮的時間從(cong) 5min.到幾天甚至幾年不等，本實驗中放置10min ，除羽葉蔦蘿和銀邊翠種子進入液氮後炸裂外，其餘(yu) 45種花卉種子經液氮處理後都有一定的發芽率。表明這些花卉種子實現了液氮超低溫保存。液氮保存對花卉種子發芽率的影響見表2。

從(cong) 表2中可以看出，液氮保存對花卉種子發芽率影響不同。與(yu) 對照組相比，有些花卉種子發芽率提高，而有的降低；不同的花卉種子與(yu) 對照組種子發芽率的差異也不同。提高者(編號1～21的花卉)從(cong) 高於(yu) 對照組1%(鳳仙花、粉紅雞冠、千日紅、蛇目菊)～28%(彩葉草)不等,占實驗用液氮保存成功花卉總數的46.7%；其中種子發芽率高於(yu) 對照組5%以上的花卉占總數的24.4%，高於(yu) 對照組10%以上的花卉占總數的11.1%。降低者（編號22～45的花卉）從(cong) 低於(yu) 對照組1%(石堿花)～31%(硫華菊)不等，占實驗用液氮保存成功花卉總數的53.3%；其中種子萌發率低於(yu) 對照組5%以上的花卉占37.8%，低於(yu) 對照組10%以上的花卉占17.8%。即液氮保存後花卉種子發芽率與(yu) 對照組差異在5%以內(nei) 的花卉約占總數的37.8%，而62.2%的花卉種子發芽率較明顯高於(yu) 或低於(yu) 對照組（差值在5%以上）。液氮罐廠家

結果表明，液氮超低溫保存後種子發芽率與(yu) 種子保存前花卉種子自身發芽率有很大關(guan) 係。超低溫保存對花卉種子發芽率也有一定影響。對一些花卉種子萌發有明顯促進作用，如彩葉草提高了28%、矮秋葵提高了17%、飛燕草和‘五彩翠菊’提高了14%、；而使另一些花卉種子發芽率明顯降低，如硫華菊降低了31%、早小菊降低了22%、矮雪輪降低了21%、金光菊降低了18%、觀賞罌粟和大花牽牛降低了16%、金魚草降低了15%。但71.1%的花卉種子液氮超低溫保存前後，種子發芽率與(yu) 對照組相比，差值在10%以內(nei) 。說明液氮超低溫保存方法是適合園林花卉種子保存的。

2.2 種子含水量對液氮超低溫保存後種子發芽率的影響

液氮超低溫保存中，所保存材料的含水量一直是人們(men) 給予特別重視的方麵，認為(wei) 它可能是超低溫保存成敗的關(guan) 鍵因子，不同的植物種子都有一個(ge) 適宜的含水量範圍。實驗中對自然含水量的花卉種子進行幹燥，然後進行液氮超低溫保存實驗，結果見表3。

表3結果顯示，液氮超低溫保存對幹燥過的花卉種子發芽率的影響與(yu) 對自然含水量種子一致，既液氮超低溫保存後有些花卉種子發芽率高於(yu) 對照組（帶#者），而大多數（58.3%）降低（帶*者）或不變（5號天人菊）。而自然含水量種子經液氮超低溫保存後發芽率降低者達53.3%（見表2），表明液氮保存不論是對幹燥過種子亦或是對自然含水量種子質量都有一定影響，使大多數種子發芽率降低。

表3還可以看到, 對照組花卉種子從(cong) 自然含水量幹燥到一般低溫保存所要求的安全含水量4%～8%左右時，種子發芽率呈三種不同變化趨勢。表3中羽衣甘藍等編號1～6 的花卉，其種子幹燥後發芽率提高（從(cong) 1%～11%不等），這類花卉占該實驗用花卉總數的28.6%（指種子含水量降到5%左右的花卉總數）；編號7～9的硫華菊、麥稈菊、粉紅雞冠種子發芽率保持不變，這類花卉占總數的14.3%；大花牽牛等編號10～21的花卉種子幹燥後，種子發芽率降低，（1%～42%不等），這類花卉占總數的57.1%。結果表明約有半數以上花卉種子在從(cong) 自然含水量向低溫保存的安全含水量幹燥過程中，發芽率會(hui) 降低，說明幹燥過程對大多數花卉種子質量有一定不良影響；而對一些花卉種子萌發則有促進作用或影響不大。編號22～24的花卉種子幹燥到低溫保存的安全含水量以下時（本實驗為(wei) 3.2%），發芽率皆明顯低於(yu) 對照，表明過度幹燥明顯影響種子質量，降低發芽率。

但是幹燥對種子發芽率的影響在液氮保存前後並不完全一致。本實驗中1～21號花卉種子含水量降到5%左右，黑心菊、早小菊、硫華菊、麥稈菊、粉紅雞冠、金光菊6種花卉，液氮保存後種子發芽率皆高於(yu) 液氮保存的自然含水量種子（帶※者,從(cong) 5%到22%不等），似乎幹燥有利於(yu) 液氮超低溫保存；而液氮保存前，幹燥對這些花卉種子發芽率影響不同，使黑心菊、早小菊提高，沒有影響硫華菊、麥稈菊、粉紅雞冠，降低了金光菊的種子發芽率。但71.4%的花卉種子幹燥到含水量為(wei) 5%時再進行液氮超低溫保存，發芽率較自然含水量種子液氮保存後低，如石堿花，自然含水量為(wei) 5.40%時，種子發芽率為(wei) 6%，液氮保存後發芽率為(wei) 5%；當種子含水量降到4.30%時，種子發芽率已下降到3%，液氮保存後發芽率為(wei) 0，未能實現液氮超低溫保存，見表3，似乎幹燥不利於(yu) 液氮超低溫保存。這樣的結果說明幹燥和液氮保存這兩(liang) 個(ge) 過程對種子發芽率影響的相對獨立性和複雜性。但有一點可以肯定，對大多數花卉而言，幹燥種子對液氮超低溫保存後種子發芽率不利，即使幹燥本身能提高種子發芽率。

花卉種子進一步幹燥到含水量更低，情況與(yu) 上述結果相似，見表3。 編號為(wei) 22～24 的‘矮翠菊’、矢車菊、‘五彩翠菊’。當種子含水量降低到3.5%左右時，‘矮翠菊’和矢車菊種子發芽率明顯低於(yu) 對照組種子，但液氮保存後，‘矮翠菊’種子發芽率高於(yu) 其對照組種子液氮超低溫保存後種子發芽率，而矢車菊則明顯降低。‘五彩翠菊’則表現出一致，即種子幹燥後，發芽率由對照的64%升高到72%；液氮超低溫保存後發芽率由對照組的78%上升到80%。

上述結果表明，花卉種子含水量對液氮超低溫保存效果有一定影響。不同含水量花卉種子超低溫保存後種子發芽率不同。有些花卉種子在自然含水量狀態下進行液氮保存有較高的發芽率，而有些則進行幹燥後進行液氮超低溫保存有較高的發芽率。而幹燥對種子發芽率影響在液氮超低溫保存前後並不完全一致。

2.3 化凍方式對液氮超低溫保存的影響

液氮超低溫保存中，冰凍傷(shang) 害有時在冰凍過程中不發生，但在解凍過程中發生。因此，化凍方法對液氮超低溫保存技術研究非常重要。實驗中采用種子從(cong) 液氮中取出後在室溫和溫水浴中兩(liang) 種不同化凍方法。結果見表4。

從(cong) 表4中可以看出，化凍方式對液氮超低溫保存後種子發芽率有明顯影響，溫水浴化凍的種子，其發芽率高於(yu) 室溫化凍。僅(jin) 就本實驗用的花卉來看，花卉液氮超低溫保存中，快速化凍優(you) 於(yu) 室溫化凍。