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液氮超低溫保藏菌種程序
時間:2020-08-19 14:36來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊:
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1、容器的選擇：使用帶螺旋蓋的2ml塑料安培瓶。 液氮罐
2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鍾，衝洗幹淨，棄去含有藍色染料的安培瓶，其餘的安培瓶備用。
3、打印標簽（激光打印）。
4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗幹淨安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鍾，幹燥並將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鍾。
5、保藏菌菌齡：處於最大生長量階段或對數生長期後期。
6、保護劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞碸作保護劑。
1）甘油的準備：在121℃滅菌15分鍾，2-8℃貯存。甘油一般以兩倍最終所需濃度的水溶液保存，然後與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液，則以最終所需濃度的水溶液保存。
2）二甲基亞碸：用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞碸漂洗。無菌的二甲基亞碸以10-15ml裝量2-8℃避光保存。
7、分裝：在無菌條件下，將細胞懸液（從平板上打下直徑為5cm的菌塊）分裝於安培瓶中，並注入保護劑，擰緊螺旋蓋。
8、將安培瓶固定在鋁夾上，貼好標簽。為了便於取用，一般一個鋁夾上僅放一個菌株。
9、將控溫係統先預冷到4℃，再將鋁夾放入其中。以每分鍾1℃降溫至-40℃，然後以每分鍾10℃降溫至-90℃。降溫以後，將鋁夾轉移至處於液氮中的儲存器中保存。
10、菌種的複活：將液氮保藏的菌種取出，迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鍾,等完全解凍後，再及時轉接到合適的培養基中培養。液氮罐
2、檢查安培瓶是否滲漏：用0.05%的亞甲基藍水溶液在4℃浸泡30-45分鍾，衝洗幹淨，棄去含有藍色染料的安培瓶，其餘的安培瓶備用。
3、打印標簽（激光打印）。
4、容器的滅菌：先用蒸餾水漂洗幹淨安培瓶，再用蒸餾水在滅菌鍋中121℃浸泡滅菌15分鍾，幹燥並將打印好的標簽放入安培瓶中，略擰緊螺旋蓋，再行121℃滅菌30分鍾。
5、保藏菌菌齡：處於最大生長量階段或對數生長期後期。
6、保護劑：選用5-10%的甘油或二甲基亞碸作保護劑。
1）甘油的準備：在121℃滅菌15分鍾，2-8℃貯存。甘油一般以兩倍最終所需濃度的水溶液保存，然後與同等量的細胞懸液混合。若不用細胞懸液，則以最終所需濃度的水溶液保存。
2）二甲基亞碸：用0.22um的聚四氟乙烯過濾膜過濾除菌。過濾膜預先用甲醇和二甲基亞碸漂洗。無菌的二甲基亞碸以10-15ml裝量2-8℃避光保存。
7、分裝：在無菌條件下，將細胞懸液（從平板上打下直徑為5cm的菌塊）分裝於安培瓶中，並注入保護劑，擰緊螺旋蓋。
8、將安培瓶固定在鋁夾上，貼好標簽。為了便於取用，一般一個鋁夾上僅放一個菌株。
9、將控溫係統先預冷到4℃，再將鋁夾放入其中。以每分鍾1℃降溫至-40℃，然後以每分鍾10℃降溫至-90℃。降溫以後，將鋁夾轉移至處於液氮中的儲存器中保存。
10、菌種的複活：將液氮保藏的菌種取出，迅速放入37℃水浴中解凍。一般需2至2.5分鍾,等完全解凍後，再及時轉接到合適的培養基中培養。液氮罐
