液氮超低溫保藏法_raybey雷竞技官网杜瓦瓶
當前位置： 首頁 > 行業動態

液氮超低溫保藏法

時間:2020-09-02 15:17來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊: 次
液氮超低溫保藏法是目前保存微生物菌種可靠的方法，多數國家級菌種保藏單位都采用此法。液氮罐

1、準備安培管

用於液氮保藏的安培管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼矽酸鹽玻璃製造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。

2、加保護劑與滅菌

保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安培管塞上棉塞，在壓力0.11MPa，溫度121℃條件下滅菌15min；若保存黴菌菌絲體則需在安培管內預先加入保護劑，如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌種塊為限，而後再進行高壓滅菌。

3、接入菌種

將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安培管；黴菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安培管內，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

4、凍結

再將已封口的安培管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至－30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。

5、保藏

經凍結至－30℃ 的安培管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為－150℃，液態氮為－196℃。

6、恢複培養

保藏的菌種需要用時，將安培管取出，立即放入38～40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安培管，將內容物移到適宜的培養基上培養。液氮罐

此法除了適宜於一般微生物的保藏外，對於一些用冷凍幹燥法都難以保藏的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體及動物細胞都可長期保藏，而且不易發生變異。缺點是需要特殊設備。