液氮罐細胞冷凍原理是什麽？_raybey雷竞技官网杜瓦瓶
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液氮罐細胞冷凍原理是什麽？

時間:2021-01-25 14:47來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊: 次

　　細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置於(yu) *下196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再複蘇細胞用於(yu) 實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yang) 的細胞被汙染或其他意外事件而使細胞丟(diu) 種，起到了細胞保種的作用。

　　除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買(mai) 、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yang) 基中加入保護劑——終濃度5%~15%的甘油或二甲基亞(ya) 碸(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內(nei) 水分透出，減少了冰晶形成，從(cong) 而避免細胞損傷(shang) 。標準冷凍速度開始為(wei) -1到-2℃/min，當溫度低於(yu) -25℃時可加速，到-80℃之後可直接投入液氮內(nei) (-196℃)。 目前常用的保護劑為(wei) 二甲亞(ya) 碸(DMSO)和甘油，它們(men) 對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細胞。 實驗材料 儀(yi) 器：液氮罐、凍存管(塑料螺口專(zhuan) 用凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機等。 試劑：0.25%胰酶、培養(yang) 基、含保護劑的培養(yang) 基(即凍存液) 附：凍存液配製：培養(yang) 基加入甘油或DSMO，使其終濃度達5-20%。保護劑的種類和用量視不同細胞而不同。配好後4℃下保存。

　　實驗步驟

　　1、消化細胞，將細胞懸液收集至離心管中。

　　2、1000rpm離心10分鍾，棄上清液。

　　3、沉澱加含保護液的培養(yang) ，計數，調整至5×106/ml左右。

　　4、將懸液分至凍存管中，每管1ml。

　　5、將凍存管口封嚴(yan) 。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yan) ，否則複蘇時易出現爆裂。

　　6、貼上標簽，寫(xie) 明細胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細繩。

　　7、按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鍾)→冰箱冷凍室(30分鍾)→低溫冰箱(-30℃1小時)→氣態氮(30分鍾)→液氮。

　　注意：操作時應小心，以免液氮凍傷(shang) 。液氮定期檢查，隨時補充，絕對不能揮發幹淨，一般30立升的液氮能用1～1.5月。