這些化學試劑進入細胞內(nei) 可防止內(nei) 膜的冷凍損傷(shang) 。 儲(chu) 存在低溫容器內(nei) 的細胞複蘇時有必要當心操作。當小管被加熱時,所構成的 冰晶會(hui) 將細胞殺死,正確操作就可防止這種事端。隻需敏捷將樣品凍結就能削減 生機的丟(diu) 掉,做法是:將封口的小管敏捷放入 37℃的水中,直至一切的冰消融,然後翻開管口,將內(nei) 容物移入培養(yang) 基。 超低溫保藏的微生物有必要一直儲(chu) 存在溫度十分低的環境中,因而需求液氮罐。
在長時間儲(chu) 存的過程中有必要常常注意彌補液氮。 這種儲(chu) 存辦法比凍幹法需求更多的經費,包含為(wei) 了保持儲(chu) 存溫度所必要的勞動力和液氮等。
1 資料病毒超低溫保管所需資料有:熱收縮塑料管(NuncCryoflex) ,液氮罐,防護手套和麵罩,記號筆,氣體(ti) 噴燈,裝液氮的保溫瓶。
2 辦法
(1)剪一段兩(liang) 頭各超出冷凍管長度 2cm 的熱收縮塑料管。
(2)將富含弄清病毒懸液(安排培養(yang) 的上清培養(yang) 基,或安排培養(yang) 基內(nei) 的細 胞溶解產(chan) 品均可)冰浴幾分鍾,用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內(nei) ,並將蓋子擰緊。
(3)將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部,刺進正確的標簽。
(4)用噴燈當心加熱熱收縮塑料管,並使之包住冷凍管。注意不要用太高 的溫度加熱熱收縮塑料管。
(5)再當心加熱熱收縮塑料管的兩(liang) 頭,用大號鑷子夾緊管的端口至徹底密 封。
(6)將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍(操作時需求戴麵 罩和手套) 。
(7)將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nei) ,一起記載樣品的具體(ti) 的存 放方位、試驗編號和寄存日期等。
(8)需求用時,敏捷從(cong) 液氮罐內(nei) 取出所需樣品,並投入 37℃水浴箱中凍結後,用解剖刀片在冷凍管的矽化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時不需求除掉熱收縮塑料管。