液氮保藏法是目前保存微生物菌種最可靠的方法_raybey雷竞技官网杜瓦瓶
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液氮保藏法是目前保存微生物菌種最可靠的方法

時間:2017-10-11 08:49來源: 作者:raybey雷竞技官网 點擊: 次

　　液氮罐保藏法是目前保存微生物菌種最可靠的方法，多數國家級菌種保藏單位都采用此法。

　　1 準備安培管用於(yu) 液氮保藏的安培管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼矽酸鹽玻璃製造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm 的安培瓶。

　　2 加保護劑與(yu) 滅菌保存細菌、酵母菌或黴菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安培管塞上棉塞，在壓力0.11MPa，溫度121℃條件下滅菌15min;若保存黴菌菌絲(si) 體(ti) 則需在安培管內(nei) 預先加入保護劑，如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞(ya) 碸蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以後加入的菌種塊為(wei) 限，而後再進行高壓滅菌。

　　3 接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液製成菌懸液，裝入已滅菌的安培管;黴菌菌絲(si) 體(ti) 則可用滅菌打孔器，從(cong) 平板內(nei) 切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安培管內(nei) ，然後用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

　　4 凍結再將已封口的安培管以每分鍾下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內(nei) 會(hui) 形成冰的結晶，因而降低存活率。

　　5 保藏經凍結至-30℃ 的安培管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內(nei) ，然後再將小圓筒放入液氮保藏器內(nei) 。液氮保藏器內(nei) 的氣相為(wei) -150℃，液態氮為(wei) -196℃。

　　6 恢複培養(yang) 保藏的菌種需要用時，將安培管取出，立即放入38～40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為(wei) 止。再打開安培管，將內(nei) 容物移到適宜的培養(yang) 基上培養(yang) 。

　　此法除了適宜於(yu) 一般微生物的保藏外，對於(yu) 一些用冷凍幹燥法都難以保藏的微生物如支原體(ti) 、衣原體(ti) 、氫細菌、難以形成孢子的黴菌、噬菌體(ti) 及動物細胞都可長期保藏，而且不易發生變異。缺點是需要特殊設備。